何朝晖¹，孙晓川¹，李峰²，江涌³，吴海涛¹，郑履平¹

¹重庆医科大学附属第一医院神经外科，重庆市，400016；²济宁市第二人民医院神经外科，山东省济宁市，272049；³泸州医学院神经外科，四川省泸州市，646000

重庆市卫生局资助项目（99-4004）

摘要
背景：课题组前期实验结果显示，单纯热应激处理大鼠视网膜神经节细胞计数无明显变化，轴索损伤5~7d时计数明显减少，还发现大鼠视神经牵拉伤后4h Tau蛋白表达异常。
目的：验证性观察大鼠视神经轴索损伤神经元热休克蛋白70及Tau蛋白表达的变化，关注热应激预处理对其表达的影响。
设计、时间及地点：随机对照动物实验，实验于2006-03/06在重庆医科大学附属第一医院神经病学研究所实验室完成。
材料：即用型SABC免疫组化染色试剂盒、浓缩型小鼠抗热休克蛋白70多克隆抗体和浓缩型兔抗Tau多克隆抗体均购自武汉博士德生物工程有限公司。
方法：将57只雄性Wistar大鼠随机分为4组：对单纯视神经牵拉伤组大鼠18只右侧视神经施予150～180g牵拉力建立视神经牵拉伤模型；对单纯热应激处理组大鼠18只进行热应激处理；对热应激预处理牵拉伤组大鼠18只进行热应激预处理24h后按单纯视神经牵拉伤组方法致伤。按取材时间点不同，以上3组又分为术后4，8，16h，1，3，5d 6个亚组，3只/亚组。正常对照组大鼠3只除麻醉外不做任何处理。
主要观察指标：HE染色观察视神经、视网膜神经节细胞的形态学变化，免疫组化染色检测大鼠视网膜神经节细胞中热休克蛋白70和Tau蛋白的表达。
结果：①与正常对照组比较，单纯视神经牵拉伤组视神经轴索和视网膜神经节细胞的形态发生明显的病理损伤，视网膜神经节细胞数明显减少（P＜0.01），热应激预处理牵拉伤组视神经轴索、视网膜神经节细胞病理损伤不明显，视网膜神经节细胞数与正常对照组差异无显著性意义（P＞0.05）。②与正常对照组比较，单纯视神经牵拉伤组、热应激预处理组、热应激预处理牵拉伤组视网膜神经节细胞中热休克蛋白70的表达均明显增加（P＜0.05或P＜0.01）；其中热应激预处理牵拉伤组热休克蛋白70的表达高峰时相点较单纯视神经牵拉伤组和热应激预处理组提前，维持时间较热应激预处理组长。与正常对照组比较，单纯视神经牵拉伤组伤后4～16h视网膜神经节细胞中Tau蛋白的表达明显增加（P＜0.05或P＜0.01），热应激预处理牵拉伤组视网膜神经节细胞中Tau蛋白的表达明显下降（P＜0.05或P＜0.01）。　
结论：Tau蛋白的表达在牵拉伤后增强，并在热休克蛋白70表达高峰前达到峰值，说明单纯牵拉伤诱导的热休克蛋白70表达尚不够强、不够快，所产生的神经保护作用有限；经过热应激预处理后再施予牵拉伤可显著提高大鼠视网膜神经节细胞中热休克蛋白70的表达,其表达高峰时间提前,维持时间延长，说明热休克蛋白70可能通过减轻Tau蛋白的异常聚集而发挥神经保护作用。
关键词：热应激；热休克蛋白；Tau；轴索损伤