李姣，李静琪，李学礼，吕立夏，徐 磊

同济大学基础医学院生物化学教研室，上海 200092

摘要
背景：既往研究发现脑源性神经营养因子可以促进神经细胞分化，但其作用途径是否通过调节神经元增殖和凋亡紧密关联的细胞周期相关蛋白尚不十分清楚。
目的：观察不同浓度脑源性神经营养因子在体外诱导SH-SY5Y细胞分化过程中，对细胞G₂期及其前后周期相关蛋白mRNA表达，处于不同细胞周期细胞比例的影响，以及从细胞周期的角度分析验证脑源性神经营养因子对神经细胞保护作用的分子机制。
设计、时间和地点：细胞生物学对比观察实验，于2005-03/2006-10在同济大学医学院生化教研室完成。
材料：SH-SY5Y细胞购于中国科学院上海细胞所，脑源性神经营养因子由以色列Alomone labs提供，全反式维甲酸购自美国Sigma-Aldrich公司。
方法：培养的SH-SY5Y细胞分别进行如下干预：空白对照组（ITS组）：于基础培养液Insulin-Transferrin Selenium-X（ITS）中培养7 d； 维甲酸组：于含有10 μmol/L维甲酸的ITS培养基中培养7 d；不同浓度的脑源性神经营养因子组：与维甲酸组同样处理5 d，继而分别于含低（1 μg/L）、中（10 μg/L）、高（100 μg/L）3种浓度脑源性神经营养因子的ITS培养液中继续培养2 d。每组实验重复3次。
主要观察指标：实时定量RT-PCR法检测周期蛋白A1，周期蛋白B1，周期蛋白B2，周期蛋白依赖性激酶1，周期蛋白依赖性激酶5 mRNA水平。荧光激活细胞分类术检测各组细胞处于G₁、S及G₂期的细胞百分率。
结果：高浓度脑源性神经营养因子组周期蛋白A1的mRNA含量明显低于维甲酸组（P<0.05）；在各浓度脑源性神经营养因子组中，周期蛋白B1的mRNA含量与对照组及维甲酸组比较均明显降低（P<0.05或P<0.01）；仅高浓度组周期蛋白B2和周期蛋白依赖性激酶1的mRNA含量显著降低（P<0.01，P<0.05）；低浓度和中浓度脑源性神经营养因子组周期蛋白依赖性激酶5 mRNA含量均高于维甲酸组（P<0.05）。脑源性神经营养因子各浓度组处于G₁期的细胞百分率均显著高于维甲酸组和对照组（P<0.01），而处于S期的细胞百分率显著低于维甲酸组（P<0.01），且低浓度和高浓度组同时低于对照组（P<0.01）。
结论：脑源性神经营养因子可使处于G₁期的细胞比率显著提高，不引起细胞G₂期及其前后周期相关蛋白mRNA表达的异常升高，提示脑源性神经营养因子不具有诱导神经细胞进入细胞凋亡程序的危险。  
关键词：脑源性神经营养因子；诱导分化；细胞周期相关蛋白；实时定量RT-PCR；荧光激活细胞分类术；SH-SY5Y细胞系