李浩鹏，陈杰，贺西京，徐思越，刘宇

国家自然科学基金资助项目（30672136）

摘要
背景：已有研究证实马尾神经受压迫后可引起脊髓前角运动神经元的凋亡，p75NTR和Pro-NGF结合启动凋亡通路也可诱导神经元凋亡，但是关于脊髓前角神经元凋亡的时序性与p75NTR之间的关系却少见报道。
目的：课题创新性提出马尾神经受压迫大鼠不同时间点脊髓前角神经元的凋亡与Pro-NGF-p75NTR-JNK 信号通路的激活相关，拟希望实验结局予以验证。
设计、时间及地点：随机对照的动物实验，于2008-04/11在西安交通大学医学实验中心完成。
材料：SP法试剂盒购自武汉博士德公司，原位末端标记凋亡检测试剂盒购自美国Promega公司。AEG-220G型电子显微镜购自日本日立公司。
方法：将健康成年雌性SD大鼠48只，随机分为3组：正常组6只、假手术组6只和压迫组36只，其中压迫组按压迫时间不同又随机分为6个亚组：1d组，3d组，5d组，7d组，14d组和28d组，6只/组。压迫组置入圆柱形硅胶棒压迫椎管截面的75%；假手术组只切除锥板；正常组未予任何处理。
主要观察指标：各组分别于受压迫时间1，3，5，7，14和28d后取L₂-₃脊髓前角组织，进行免疫组织化学观察、原位细胞凋亡检测检测和透射电镜观察。以尼氏染色法检测SD大鼠L₂脊髓神经元死亡情况，应用免疫组化方法检测Pro-NGF、p75NTR和JNK在实验动物L₂脊髓神经元表达情况，应用TUNEL荧光法检测大鼠L₂脊髓神经元凋亡的变化。对各组脊髓神经元阳性神经元数量进行两样本t检验，并对神经元p75NTR阳性表达与凋亡进行相关性分析。
结果：正常组和假手术组L_2-3脊髓有少量神经元凋亡。压迫3d组，脊髓前角开始有神经生长因子前体、神经营养因子受体和c-Jun的N-末端激酶表达，压迫后7d达到峰值，之后仍有表达，但呈下降趋势。压迫组与假手术组神经元表达主要为神经生长因子前体和神经营养因子受体，压迫组各时间点c-Jun N-末端激酶阳性神经元数量明显高于假手术组（P<0.05）。压迫后1d组即在脊髓前角发现神经元少量神经元凋亡，凋亡神经元数量随时间推移逐渐增多，压迫后7d达顶峰，后逐渐减少，至压迫后28d后仍有神经元凋亡。急性马尾压迫后，受压马尾发出段脊髓神经元神经元的凋亡与p75NTR的高表达存在平行变化的关系，脊髓神经元神经营养因子受体的表达和凋亡呈正相关（r=0.75，P<0.05）。
结论：马尾神经受压迫后脊髓前角运动神经元出现明显时序性凋亡现象。马尾神经损伤后所发生的神经元凋亡与神经营养因子受体在L_2-3脊髓神经元中的表达有关。
关键词：马尾综合征；神经营养素受体；脊髓；神经元；凋亡