曹江北¹，米卫东¹，李云峰²，陈红霞²

¹解放军总医院麻醉手术中心，北京市 100853；²解放军军事医学科学院毒物药物研究所，北京市 100853

国家自然科学基金资助项目（30571791）

摘要
背景：课题组的前期研究发现一定浓度条件下异丙酚可以促进体外培养的海马神经前体细胞增殖，同时可以改善皮质酮对海马神经前体细胞增殖的抑制作用。γ-氨基丁酸A受体是异丙酚作用的靶受体，异丙酚的促细胞增殖作用是否也是通过γ-氨基丁酸A受体途径实现的呢？
目的：首次提出异丙酚可通过激活γ-氨基丁酸A受体的表达而拮抗皮质酮抑制大鼠海马神经前体细胞增殖的理论假设，实验目的也在于以结果验证该假设。
设计、时间及地点：对比观察的细胞实验，于2005-04/2006-04在军事医学科学院药物毒物研究所完成。
材料：异丙酚和皮质酮购于瑞典AstraZeneca公司，γ-氨基丁酸A受体拮抗剂荷包牡丹碱购于瑞士Alexis公司，噻唑蓝购于德国的Merck公司，³H-胸腺嘧啶核苷购于中国原子能研究所。
方法：体外培养SD大鼠海马神经前体细胞，选择第二代生长良好的细胞，在其培养液中分别加入不同浓度异丙酚、皮质酮及荷包牡丹碱共同培养海马神经前体细胞：异丙酚0.5 μmol/L，异丙酚2.5 μmol/L，皮质酮100 μmol/L，荷包牡丹碱10 μmol/L，皮质酮100 μmol/L和异丙酚0.5 μmol/L，皮质酮100 μmol/L和异丙酚2.5 μmol/L，皮质酮100 μmol/L和荷包牡丹碱10 μmol/L及异丙酚0.5 μmol/L，皮质酮100 μmol/L和荷包牡丹碱10 μmol/L及异丙酚2.5 μmol/L ，皮质酮100 μmol/L和荷包牡丹碱10 μmol/L，在细胞培养液中加入相应药物并使其终浓度达到所要求的浓度继续培养24h。以未加入药物的神经前体细胞为对照组。
主要观察指标：利用噻唑蓝法和³H-胸腺嘧啶核苷掺入法检测异丙酚及荷包牡丹碱对皮质酮抑制体外培养大鼠海马神经前体细胞增殖的影响。采用免疫细胞化学的方法检测海马神经前体细胞γ-氨基丁酸A受体的表达。采用ELISA法定量检测海马神经前体细胞膜γ-氨基丁酸A受体。
结果：0.5，2.5 μmol/L异丙酚可以减轻皮质酮引起的大鼠海马神经前体细胞增殖的抑制作用，荷包牡丹碱可完全拮抗其作用(P<0.05或P<0.01)。皮质酮100μmol/L可以使海马神经前体细胞γ-氨基丁酸A受体表达下调(P<0.05)；加入2.5 μmol/L异丙酚后，γ-氨基丁酸A受体表达上调(P<0.05)。
结论：异丙酚激活和提高了γ-氨基丁酸A受体的表达，其减轻皮质酮引起体外培养的大鼠海马前体细胞增殖的抑制作用的机制可能与此有关。
关键词：异丙酚；皮质酮；海马；受体，γ-氨基丁酸A；干细胞