王宁， 薛荣亮， 姚凤珍， 何家璇， 吕建瑞， 张蓬勃， 吴刚

国家自然科学基金(No. 30571790)

摘要
背景：有研究表明c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinases, JNK）通路的选择性抑制剂SP600125对大鼠脑缺血再灌注后神经元有保护作用。
目的：验证性观察SP600125对脑缺血再灌注大鼠神经元的保护作用，以及其神经保护作用是否通过JNK信号通路途径实现。
设计、时间和地点：随机对照动物实验，于2007-06/2008-09在西安交通大学医院院动物实验中心实验室完成。
材料：JNK抑制剂SP600125购自美国Biosource公司，兔抗大鼠抗p-JNK多克隆抗体购自美国Cell Signaling公司，兔抗大鼠抗XRCC1，Ku70多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，TUNEL试剂盒购自北京华美生物有限公司。
方法：雄性4月龄SD大鼠108只，随机分为3组，36只/组。假手术组（Sham组）和缺血再灌注组（I/R组）侧脑室注射10μL 1%的二甲基亚砜，SP600125组（pre-SP组）侧脑室注射3μg/μL的SP600125 10μL，注射30min后，I/R组和SP600125组采用4-VO法结扎颈动脉建立大鼠全脑缺血模型，全脑缺血6min后进行再灌注，再分为再灌注2，6，12，24，48，72h 6个亚组，6只/亚组。假手术组不结扎颈动脉。  
主要观察指标：HE染色观察大鼠海马CA1区细胞的存活情况，TUNEL法检测CA1区细胞凋亡情况，免疫组织化学方法检测CA1区p-JNK及DNA修复蛋白XRCC1和Ku70的表达。
结果：脑缺血再灌注后海马CA1区神经元存活数目明显减少，凋亡数目明显增多(P<0.01)，与缺血再灌注组比较，SP600125组海马CA1区神经元存活数目明显增加，凋亡数目明显减少(P<0.01)。脑缺血再灌注后海马CA1区p-JNK的表达明显增多，XRCC1和Ku70的表达明显减少（P<0.05），与缺血再灌注组比较，SP600125组海马CA1区p-JNK的表达明显较少，XRCC1和Ku70的表达明显增多（P<0.05)。相关性分析结果显示大鼠海马CA1 区p-JNK的表达与XRCC1/Ku70的表达呈负相关（r=-0.983，-0.953，P<0.01）。
结论：SP600125可减少全脑缺血再灌注损伤大鼠海马CA1区神经元的凋亡或死亡，实验结果显示其神经保护作用是通过抑制JNK磷酸化，减轻XRCC1和Ku70下调的方式来实现的。