王明山¹ 张丽娜¹ 冀翔宇² 尹燕伟² 刘红¹ 侯念果¹

¹青岛市立(东部)医院麻醉科，山东省青岛市，266071；²青岛大学医学院附属医院麻醉科，山东省青岛市，266071

山东省卫生厅基金项目（2001CAICKAF）

摘要
背景：目前对脑缺血的研究多以青年动物为实验对象，且缺血时间多在传统的5min “安全时限”以上。随着对神经元凋亡认识的加深，5min以内的短暂性脑缺血即有可能对老年动物脑组织敏感区造成损伤，但这一理论尚待更多研究数据支持。
目的：观察5min内脑缺血再灌注损伤对老年大鼠皮质和海马组织水肿、AQP-4表达和神经元凋亡的影响，并比较皮质和海马对缺血敏感性的差异。
设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2008-04/2009-03在青岛大学医学院脑血管病研究所完成。
材料：兔抗鼠AQP-4多克隆抗体，原位末端标记试剂盒，SABC免疫组化试剂盒均购自武汉博士德公司。
方法：将健康雄性老年Wistar大鼠160只随机分为4组：假手术组和脑缺血1，3，5min组，40只/组。脑缺血1，3，5min组参照Pusinelli的四动脉阻断法建立全脑缺血模型，依再灌注时间不同各组又分为再灌注12h，1，2，3，7d 5个亚组，8只/亚组。假手术组仅暴露第1颈椎双侧翼孔和双侧颈总动脉而不烧灼，不夹闭动脉。
主要观察指标：干湿重法计算皮质和海马区脑组织含水量，HE染色观察大鼠皮质和海马的组织病理学改变，免疫组化方法检测皮质和海马区脑组织AQP-4的表达，TUNEL法检测皮质和海马神经元的凋亡情况。
结果：与假手术组比较，脑缺血1，3min组的皮质和海马及脑缺血5min组的皮质脑组织含水量及AQP-4表达差异均无显著性意义（P>0.05），脑缺血5min组海马脑组织含水量及AQP-4表达明显增加（P<0.05或P<0.01）。假手术组和缺血1min组海马和皮质、缺血3min组皮质均有少量神经元凋亡，缺血3min组海马、缺血5min组海马和皮质凋亡神经元数量明显增加（P<0.05或P<0.01），神经元凋亡在缺血再灌注12h开始增加，2d达高峰（P<0.01）。
结论：脑缺血5min即可造成老年大鼠海马组织水肿、AQP-4表达和神经元凋亡增加。其中，神经元凋亡较脑水肿和AQP-4高表达对脑缺血的反应更为敏感，海马较皮质对缺血亦更为敏感。
关键词：脑缺血再灌注损伤；海马；皮质；脑水肿；AQP-4；凋亡；大鼠；老年