李映红¹,吴正治¹, 李明¹,张晓丽¹,王济国¹,杨敏¹,陈蔓茵¹, Andrew C. J. Huang²

1南方医科大学附属深圳医院，广东省深圳市 518033; 2 Larry Hillblom Islet Research Center, David Geffen School of Medicine, UCLA, Los Angeles, CA 90024, USA.

国家中医药科技专项项目（02-03LP41）；广东省重大科技专项课题(2006B35630007); 深圳市科技计划重大项目（JH200506030643A）

摘要
背景：研究发现，阿尔茨海默病的特征性病理产物淀粉样β蛋白可引起神经元内质网应激性损伤。但从内质网应激角度研究中药防治阿尔茨海默病的作用机制的研究较罕见。
目的：观察治疗阿尔茨海默病的中药天然脑活素（NC）对Aβ_1-40所致骨髓间充质干细胞内质网应激（ER stress）损伤后，细胞应激性损伤的保护性应激蛋白—内质网分子伴侣GRP78和GRP94，以及内质网膜上的促凋亡分子Caspase-12的表达变化。
设计、时间和地点：平行对照实验，于2006-09/2008-11在南方医科大学深圳医院中西医结合研究所完成。
材料：无菌获取6～8周龄SD大鼠胫骨和股骨骨髓，采用全骨髓法和差时贴壁筛选法原代培养和纯化获得实验用骨髓间充质干细胞。Aβ_1-40购自美国Sigma公司；天然脑活素由深圳市中西医结合研究所提供，主要由人参、天麻、银杏叶以1:2: 2的比例组成，按照传统水提取方法制备成1:20提取物，每g提取物相当于生药（中药原药）量20g。成年雄性新西兰家兔12只中的6只以0.976g/（kg.d）量灌胃天然脑活素提取物1个月以制备含药血清，另6只灌胃相同体积的生理盐水1个月以制备正常空白血清。
方法：以500 nmol/L Aβ_1-40干预细胞诱导原代培养的大鼠骨髓间充质干细胞模拟细胞内质网应激模型，以不同剂量（2.5%，5%，10%含药血清体积比浓度）的天然脑活素含药血清孵育阿尔茨海默病细胞模型。以正常空白血清干预的骨髓间充质干细胞为空白对照组。
主要检测指标：应用RT-PCR技术和荧光免疫细胞化学染色法检测大鼠骨髓间充质干细胞的GRP78和GRP94，以及Caspase-12的mRNA和蛋白质的表达。
结果： Aβ_1-40干预后，大鼠骨髓间充质干细胞GRP78和GRP94及Caspase-12 mRNA和蛋白质的表达均明显增高（P＜0.05），模拟内质网应激细胞模型成功。予以天然脑活素处理后，大鼠骨髓间充质干细胞GRP78和GRP94 mRNA和蛋白表达均明显高于内质网应激模型组（P＜0.05 or P＜0.01），而 Caspase-12 mRNA和蛋白表达均较内质网应激模型组显著下调(P＜0.05 or P＜0.01) ，且该作用表现为天然脑活素剂量依赖性。
结论：天然脑活素可以剂量依赖的形式下调Aβ_1-40诱导的骨髓间充质干细胞内质网应激状态下Caspase-12的表达，上调GRP78和GRP94表达。
关键词：内质网应激（ERS）；Aβ_1-40；阿尔茨默氏病(AD); 天然脑活素（NC）；保护作用；骨髓间充质干细胞（MSC）