常全忠，张淑玲，尹金宝

遵义医学院珠海校区生理学教研室，广东省珠海市 519041

常全忠，男，1965年生，博士，教授，硕士生导师，研究方向：神经生物学。
cqzchang@tom.com

贵州省科技厅资助项目（黔科合J字（2007）2127），贵州省科技厅攻关项目（黔科合SY字[2009]3075），珠海市科技局资助项目（PC20081010）

摘要
背景：氯通道参与非神经细胞凋亡的报道较多，而氯通道是否参与了缺血性神经元的凋亡未见报道。
目的：模拟缺血性脑损伤性神经元凋亡机制的一氧化氮毒性学说，利用一氧化氮供体3-吗啉斯德酮胺（SIN-1）诱导离体培养的大鼠海马神经元凋亡，观察氯通道阻断剂4-乙酰氨基-4’-异氰酸芪-2,2’-二磺酸（SITS）和4-4-二异硫氰基苯-2,2’-二磺酸（DIDS）对海马神经元凋亡的拮抗效应。
设计，时间及地点：对比观察，体外实验，于2009-01/05在遵义医学院珠海校区实验室完成。
材料：3-吗啉斯德酮胺、4-乙酰氨基-4’-异氰酸芪-2,2’-二磺酸、4-4-二异硫氰基苯-2,2’-二磺酸购自美国Sigma公司。
方法：出生1d内SD大鼠海马神经元体外培养12d后，随机分为对照组、SIN-1组和氯通道阻断剂组。SIN-1组用一氧化氮供体3-吗啉斯德酮胺诱导18h，建立缺血性神经元凋亡模型。氯通道阻断剂组用氯通道阻断剂4-乙酰氨基-4’-异氰酸芪-2,2’-二磺酸或4-4-二异硫氰基苯-2,2’-二磺酸均与3-吗啉斯德酮胺同时作用18h。对照组仅用DMEM/Ham’s F12完全培养基培养。
主要观察指标：各组神经元分别在相应的时间点进行Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞数、神经元核形态的变化，用MTT实验定量检测神经元的存活率，用western blot 分析凋亡信号分子caspase-3的变化。
结果：培养基中加入浓度为1mmol/L的3-吗啉斯德酮胺能明显诱导50%~60%的神经元发生凋亡；4-乙酰氨基-4’-异氰酸芪-2,2’-二磺酸和4-4-二异硫氰基苯-2,2’-二磺酸能呈剂量依赖性地抑制一氧化氮诱导的神经元损伤，并能抑制损伤所引起的caspase-3的激活，减少神经元凋亡的数目，提高神经元的存活率。
结论：氯通道阻断剂对一氧化氮诱导体外培养的大鼠海马神经元凋亡有一定的保护作用；氯通道可能参与了缺血性脑损伤后的神经元凋亡。
关键词：氯通道；一氧化氮；海马神经元；大鼠；凋亡；脑损伤；神经再生

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