铅对原代培养大鼠海马神经元细胞周期、DNA损伤和cyclin D1表达的影响：有剂量依赖效应吗？
高双（中国医科大学生物化学教研室，110001）
摘要
背景：大量研究证实，海马是铅作用于神经系统时导致神经损害的主要靶点部位之一，但其作用的分子生物学机制，包括铅对细胞周期的影响至今未明。
目的：首次设计不同浓度铅对原代培养大鼠海马神经元的细胞周期、DNA损伤和cyclin D1表达影响的实验观察。
设计、时间及地点：随机对照体外实验，于2008-07/2009-05于中国医科大学完成。
材料：cyclinD1 and-actin抗体由Santa Cruz Corp.Shanghai, China人工合成和纯化。流式细胞仪FACStar flow cytometer (Becton Dickinson, SanJose, CA, USA)。
方法：对Wistar大鼠的海马神经元进行原代培养，培养7d后，进行如下干预：对照组（加0.01mol/L PBS）、醋酸铅0.2, 1.0和10μmol/ L组（分别加入0.2, 1.0和10μmol/ L的醋酸铅）。4组海马神经神经元经以上措施干预后继续培养24h。
主要观察指标：用流式细胞仪检测铅对细胞周期的影响，用彗星实验检测DNA损伤情况，用Western印迹法检测cyclinD1表达量。
结果：细胞周期阻断：相比对照组，醋酸铅0.2μmol/L组无明显阻断细胞周期状况，在醋酸铅1.0和10μmol/L组明显增加了S和G₁ 期的细胞数量（P<0.05）。DNA损伤：醋酸铅组中的DNA的尾距（OTM）和彗尾值（% tail）相比对照组，醋酸铅1.0和10μmol/L组明显高(P<0.05)。醋酸铅0.2μmol/L组的彗尾高于对照组，差异无显著性意义（P>0.05）。细胞周期蛋白D1表达：随着醋酸铅组浓度从 0.2，1.0 至 10μmol/L 逐渐增高，cyclinD1 的蛋白表达呈逐渐下降趋势。
结论：实验结果揭示铅可以使原代培养的大鼠海马神经元细胞发生DNA损伤，且呈剂量依赖性，可以使海马神经元细胞发生细胞周期阻断，并使cyclinD1 的蛋白表达降低。
关键词：铅；细胞周期阻断；DNA损伤；细胞周期素蛋白；海马神经元

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