赵仁亮1，2，王拥军1

1首都医科大学附属北京天坛医院，北京市  100050
2青岛大学医学院附属医院神经内科，山东省青岛市   266003

青岛市科技发展计划项目（No.05-1-NS-73）

背景：短暂性脑缺血预处理可诱导脑缺血耐受已得到诸多研究证实，但脑缺血预处理后机体如何启动内源性脑保护作用的机制目前尚无定论。
目的：创新性提出以两次线栓法建立局灶性缺血再灌注模型，动态性检测预处理后缺血再灌注不同时间窗促红细胞生成素及HIF-lαmRNA及蛋白的表达，探讨促红细胞生成素与HIF-lα在脑缺血耐受中的作用。
设计、时间和地点：随机对照的动物实验，于2006-03/2007-03在青岛大学医学院解剖学研究室完成。
材料：兔抗鼠HIF-lα单克隆抗体和生物素化羊抗兔IgG购自武汉博士德生物工程有限公司，兔抗鼠EPO单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司。一步法RT-PCR 试剂盒购自德国QIAGEN公司。
方法：将健康雄性Wistar大鼠99只随机分3组：假手术组9只、未缺血预处理组45只和缺血预处理组45只。缺血预处理组采用二次线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉制备预缺血-再灌注-缺血-再灌注模型。未缺血预处理组用假手术代替预缺血。缺血预处理组和未缺血预处理组再根据第1次再灌注时间分为再灌注1，3，7，14，21d 5个亚组，9只/亚组。假手术组两次均为假手术。
主要观察指标：大鼠缺血侧大脑皮质区、纹状体及海马区HIF-lα与EPO蛋白的表达及缺血侧额顶叶皮质上部HIF-lα与EPOmRNA的表达。
结果：①组间比较：与未缺血预处理组相比，缺血预处理组再灌注1，3，7d缺血侧大脑皮质、纹状体和海马 HIF-lα蛋白表达明显增高﹙P<0.05或P<0.01﹚；缺血预处理组再灌注3和7d缺血侧大脑皮质、纹状体和海马 EPO蛋白表达，缺血侧额顶叶皮质上部HIF-1αmRNA和EPOmRNA表达明显升高（P< 0.05）。②时序表达：缺血预处理组再灌注3d缺血侧大脑皮质、纹状体和海马 HIF-lα蛋白和缺血侧额顶叶皮质上部HIF-lαmRNA表达开始升高，持续到7d后逐渐下降。EPO蛋白和mRNA表达在时序表达上与HIF-lα蛋白一致。（3）相关性：EPO mRNA表达与HIF-1αmRNA表达呈显著正相关(r=0.737，P<0.01)。
结论：缺血预处理诱导了脑缺血耐受，预缺血诱导的内源性HIF-1α及其靶基因EPO表达增加参与脑缺血耐受的形成。

关键词：缺血耐受；缺血预处理；脑缺血；大鼠；缺氧诱导因子1α；促红细胞生成素

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