湛彦强，熊薇，许杰，尹波，王芙蓉, 张苏明

（华中科技大学附属同济医院神经内科，湖北省武汉市 430030）

国家自然科学基金面上项目（NO30500167），国家科技部863项目（2007AA03Z312）

摘要：
背景：将绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）高效率的转染入神经干细胞，目前其具体方法和载体不尽相同。传统方法利用脂质体进行GFP转染标记效率低，标记时间短，近年来利用腺相关病毒转染干细胞的报道逐渐增多。
目的：比较脂质体转染与腺相关病毒（rAAV-2-EGFP）转染神经干细胞的效率，以及长期表达的稳定性，及安全性。
设计、时间及地点：细胞分子水平的平行对照实验，于2007-06/2008-03年在华中科技大学同济医学院临床神经医学研究中心实验室完成。
材料：脂质体2000购自美国invitrogen公司，rAAV-2-EGFP购自北京本元正阳基因技术股份有限公司。
方法：体外分离培养孕12d C57BL/6小鼠胚胎脑皮质细胞，对处于对数生长期的细胞分别给予以下干预：脂质体转染组向神经干细胞完全培养液中分别加入2μg pcDNA-3.0-EGFP质粒和12μg脂质体2000形成脂质体/EGFP质粒混合物转染神经干细胞；腺相关病毒转染组向神经干细胞完全培养基中按MOI=105加入rAAV-2-EGFP形成病毒转染液转染神经干细胞；阴性对照组用生理盐水代替病毒转染液。
主要观察指标：分别于转染后36h，1及2周，1及6个月，应用荧光显微镜观察绿色荧光细胞比例，应用MTT法和流式细胞仪检测转染的神经干细胞的增殖活性和转染效率。
结果：腺相关病毒组转染后36h出现绿色荧光，转染1周后效率达最高（61.17％），明显高于脂质体转染组（38.70%），两组比较有显著性差异（P<0.05）。并能长期稳定表达6个月而不衰减，且对神经干细胞的增殖活性无明显影响。脂质体转染组转染后24h出现绿色荧光，3d达最高，2周时荧光和增殖活性均基本消失。
结论：相比于脂质体rAAV-2-EGFP是一种更好的神经干细胞体外转染标记的方法。

关键词：比较　神经干细胞　转染　腺相关病毒 脂质体

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