向静，王昌铭，王景周

(解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经内科，重庆400042)

重庆市科委攻关课题  7830

摘要：
背景：脐血间质干细胞具有可以向多种组织分化且免疫原性低的特点。
目的：观察人脐血间质干细胞体外分离培养过程和向神经干细胞诱导后其标志物mRNA的表达，并对照观察植入动物体内的致瘤性。 
设计、时间和地点：细胞生物学体外实验和随机对照体内实验，于2006-08/2008-05在第三军医大学大坪医院神经内科实验室完成。
材料：脐带血来源于大坪医院妇产科足月顺产胎儿。BALB/C nu+裸鼠18只随机分为背部皮下组、颈部皮下组和对照组，6只/组。
方法：以密度梯度离心法得到脐血单个核细胞，用体外贴壁生长的方法获得脐血间质干细胞，使用神经生长因子和维甲酸联合诱导脐血间质干细胞向神经干细胞分化，收集诱导分化后7 d的间质干细胞，调整密度为1×107/mL。向背部皮下和颈部皮下组裸鼠背部或颈部皮下注射0.5 mL细胞悬液，对照组裸鼠背部及颈部皮下各3只注射0.5 mL生理盐水。
主要观察指标：倒置显微镜观察细胞组织形态学变化，流式细胞术鉴定培养的脐血间质干细胞，RT-PCR法检测诱导前后巢蛋白(Nestin)及Musashi-1 mRNA表达，HE染色法观察脐血间质干细胞移植后的致瘤性。
结果：脐血单个核细胞贴壁生长后大部分细胞呈梭形，该细胞不表达CD34，CD11a和CD11b，强表达CD29，符合脐血间质干细胞特征。诱导后，神经干细胞表面标志Nestin及Musashi-1表达明显增强，48 h达高峰，然后逐渐减弱。脐血间质干细胞接种后在裸鼠皮下不能形成肿瘤，与对照组相比，细胞形态未出现恶性变化。
结论：脐血间质干细胞经分离培养和诱导后可分化为神经干细胞，且在裸鼠体内不具有成瘤性。

关键词：脐血间质干细胞；神经干细胞：诱导分化：巢蛋白；致瘤性

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