杨平林， 贺西京， 李浩鹏， 兰宾尚， 王国毓， 刘亦恒

（西安交通大学医学院第二附属医院骨二科，陕西省西安市  710004）

国家自然科学基金资助项目（30371442）；教育部新教师基金资助项目（20070698073）

背景：有研究表明，星形胶质细胞可能具有神经干细胞/神经前体细胞特性，具有分化成神经元的能力。
目的: 观察脊髓损伤后损伤反应性巢蛋白（neuroepthelial stem cell protein，nestin）和胶质酸性纤维蛋白（glial fibrillary acid protein,GFAP）的表达，损伤区中央管周围室管膜区以外的脊髓灰质和白质中表达高峰期nestin+/GFAP+共存细胞是否具有神经干细胞特性。
设计、时间及地点：随机分组对照实验，于2004-01/2006-12在西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室完成。
材料：兔抗大鼠Nestin，β-tubulin III抗体，小鼠抗大鼠GFAP抗体购自北京中山生物有限公司，小鼠抗大鼠半乳糖脑苷脂（galactocerebroside，GaLC）抗体购自美国Chemicon公司，流式细胞仪购自美国BD Bioscience公司。
方法：雄性8周龄SD大鼠60只，随机分为对照组（n=12）和模型组（n=48）。模型组采用动脉瘤夹压迫法建立成年大鼠脊髓损伤动物模型，对照组不作任何处理。分离对照组及模型组nestin+/GFAP+表达高峰期的中央管周围室管膜区以外的脊髓灰质和白质，制成单细胞悬液，进行原代和传代培养，并用含血清的神经干细胞完全培养基诱导分化。
主要观察指标：分别于损伤后1，3，5，7，14，28，56d，应用免疫组织化学和免疫荧光双标技术检测脊髓损伤组织nestin和GFAP的表达。应用免疫荧光细胞化学法和流式细胞术检测细胞的增殖和分化能力。 
结果：与对照组比较，模型组nestin和GFAP的表达明显增加（P<0.05），3~7d逐渐达到高峰。其中，中央管周围室管膜区几乎均为nestin+/GFAP–细胞，中央管周围室管膜区以外的灰质和白质中几乎全是nestin+/GFAP+细胞，并具有星形胶质细胞形态。分离培养的细胞中，模型组有大量高度表达的nestin+/GFAP+共存细胞，培养后形成大量细胞克隆球，nestin 免疫荧光染色呈强阳性。诱导分化后，可见大量GaLC-nestin，β-tubulin III-nestin，GFAP-Nestin免疫染色阳性的细胞；对照组上述反应不明显。与对照组比较，模型组处于细胞周期S期的细胞及增殖指数的比例均明显增高（P<0.01）。
结论：成年大鼠脊髓损伤可诱导损伤区中央管周围室管膜以外的脊髓灰质和白质中的nestin+/GFAP+高表达，此共表达细胞具有自我更新和多向分化潜能，可能是中枢神经系统的神经干细胞。

关键词：反应性星形胶质细胞   神经干细胞   脊髓损伤   巢蛋白  胶质纤维酸性蛋白  



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